不同连接肽的双价单链抗体基因的构建及表达

摘要 : 采用基因重组技术分别借助不同长度的连接肽[G4S和(G4S)3]， 将两个相同的抗人大肠癌单链抗体基因ND-1scFv共价连接， 构建表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2， 并在大肠杆菌BL21中表达ND-1sc(Fv)2的融合蛋白。应用Ni2+亲和层析方法对表达产物进行纯化， SDS-PAGE、免疫荧光法（IFA）和ELISA对纯化后的蛋白质进行纯度和免疫活性分析。结果表明成功构建了表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2， 并在大肠杆菌中获得高效表达， 其表达产物以不溶性包涵体形式存在。纯化后ND-1sc(Fv)2-5、ND-1sc(Fv)2-15的蛋白质纯度分别为90%和86%。IFA及ELISA结果表明， 二者均保留了亲本抗体的免疫活性， 对表达在人大肠癌细胞上的肿瘤相关抗原LEA具有特异结合活性， 其免疫活性均明显高于ND-1scFv， 其中ND-1sc(Fv)2-15的免疫活性更接近于亲本单抗ND-1， 该抗体有望成为大肠癌临床导向诊断和治疗的理想载体。