用EndoV和碱电泳法检测哺乳动物细胞嘧啶二聚体的切除修复

摘要 : 紫外线(UV)辐射是自然环境中重要的DNA致伤因子。UV辐射在DNA造成的最主要一类损伤产物是环丁烷嘧啶二聚体(pyrim-idine dimer,PD),它是由DNA中一条多核着酸链上两相邻嘧啶碱基各自的C5和C6共价连接形成的环丁烷结构。哺乳动物细胞主要通过切除修复途径移除PD,恢复DNA的正常结构。一种从噬菌体T4感染的E.coli中提取的T4核酸内切酶V(EndoV)能特异识别PD,并在该损伤位点切断磷酸二醋键,造成单链断裂。本文即以EndoV为探针,以其敏感位点(endonuclease-sensitive-site,ESS)的产生和l 消失作为PD 生成及被切除修复的指征。End oV 作用引起的单链断裂用碱电泳定量测定。借此方法， 我们观察了三种人细胞(人宫颈癌细胞HeLa-S 3, 正常人胚肺成纤维细胞HEL-9 1 02 ， 人前髓白血病细胞HL- 60)丰11 两种恼齿动物细胞(小鼠乳癌细胞SR-1 ，中国仓鼠卵巢细胞CHO-Y 1) 对略、班二聚体的切除修复过程， 其中三株细胞(SR-1， HEL-9102 , HL-60 ) 尚未见有这方面的工作报道。