鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定

采克俊刘莉^* 丁海雷¹ 张易祥丁志丽张念慈

湖州师范学院生命科学学院, 湖州313000; ¹扬州大学动物科学与技术学院, 扬州225009

摘要 : 以18天鸡胚睾丸为实验材料，经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液。在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后，获得了纯度约为90%的单层支持细胞。对纯化的培养物染色鉴定，结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性，而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性; 油红O染色显示，支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴，核内见双极小体; 吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA; 罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体; Hoechst 33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形，核的长轴与细胞长轴平行; 免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白。建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法。