土贝母苷甲对人脐静脉内皮细胞凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响

摘要 : 研究了土贝母苷甲(下称苷甲)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells， HUVECs)凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响。包括: MTT法检测苷甲对HUVECs生长的影响; 荧光显微镜观察苷甲作用下HUVECs的形态变化; 流式细胞术分析苷甲对HUVECs周期及凋亡的影响; 聚碳酸酯膜小室(Transwell model)趋化运动模型检测苷甲对HUVECs运动能力的影响; 鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane， CAM)试验检测苷甲对人鼻咽癌细胞(human nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells， CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响; 免疫组化法检测苷甲对BALB/c裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(microvessel density， MVD)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor， bFGF)和血小板源生长因子(platelet-derived growth factor， PDGF)表达的影响。苷甲明显抑制HUVECs的生长， 其抑制效果与剂量和作用时间相关， 苷甲作用HUVECs 24、48、72 h其IC₅₀值分别为24.2、21.4、17.9 μmol/L; 苷甲作用下HUVECs发生周期阻滞， 呈现典型的凋亡特征， 20.0 μmol/L苷甲作用12、24、36 h HUVECs的凋亡率分别为11.4%、20.8%、25.3%; 20.0 μmol/L 苷甲处理HUVECs 24 h， 对细胞迁移抑制率为58.4%; 苷甲抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成， 并与剂量相关; 苷甲应用后瘤组织MVD明显减少， VEGF、bFGF、PDGF表达下调。苷甲有明显的抑制血管生成活性， 其抑制血管生成作用与诱导血管内皮细胞凋亡， 抑制其运动能力， 下调VEGF、bFGF和PDGF的表达有关。