牛胚胎滋养层巨细胞的体外分离培养

摘要 : 建立牛胚胎滋养层细胞的体外分离、培养方法。取怀孕牛45~60天的完整子宫， 无菌条件下收集胚胎子叶， 采用胶原酶消化方法分离细胞。将细胞随机分为两组， 一组用差异贴壁法纯化滋养层细胞， 另一组未纯化则用含15%胎牛血清和滋养层细胞生长添加剂(trophoblast growth supplement， TGS)的DMEM培养基培养细胞。采用台盼蓝和Hoechst 33342细胞染色液对细胞活力及形态学进行分析， 采用免疫细胞化学法进行细胞纯度鉴定。结果显示， 本实验分离的细胞经台盼蓝染色后记录细胞存活率大于90%， 核染可见典型双核特征。纯化组细胞经差异贴壁法纯化后双核滋养层巨细胞(binucleate trophoblast giant cells， TGC)纯度可达95%， 未纯化组细胞中TGC只占45%~50%左右。抗细胞角蛋白抗体检测呈阳性， 抗波形蛋白抗体检测呈阴性。细胞经过4次传代后， 可以存活60天。本试验成功建立了一种快速、简便、能够培养高纯度牛胚胎滋养层细胞的方法， 为进一步研究滋养层细胞与相关病原侵入机制打下了基础。