犬骨髓间充质干细胞体外分离、培养及鉴定方法

钟世根¹　王志刚¹　凌智瑜²*　殷跃辉²　李　巧¹　骆　杰¹　李兴升³

¹重庆医科大学超声影像学研究所, ²重庆医科大学附属第二医院心血管内科, ³重庆医科大学附属第二医院老年科, 重庆400010

摘要 : 探讨一种可靠、纯度高的犬骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外提取分离、纯化、培养和鉴定的方法。采用骨髓穿刺、Percoll密度梯度离心法分离出犬骨髓单个核细胞，结合贴壁培养法获得纯度高的犬BMMSCs，应用细胞免疫化学和流式细胞仪对犬BMMSCs表面标记蛋白进行细胞鉴定和周期测定。结果显示分离的细胞CD29、CD44均呈阳性表达， CD31、CD34、CD45和vWF的表达为阴性; 88.88%的细胞处在G₀/G₁期; 由此证明所分离的细胞为犬BMMSCs， 2周内经3代培养即可扩增到10⁷细胞数量级，纯度可达到99%以上，为干细胞移植治疗缺血性心脏病提供充足的细胞来源。