应用滤纸吸附-PCR法和改进的亚克隆方法快速筛选克隆甜橙细胞壁酸性转化酶基因(CS-CWI)

摘要 : 据GenBank 中已知的植物细胞壁转化酶基因的保守区序列设计一对PCR 引物，分别以滤纸(吸附有甜橙基因纽噬茵体文库LB 平板的噬菌体)和Top agarose( 滤纸吸附后的LB 平
    板)的SM 洗脱液为模板，仅通过7 次PCR 就快速、准确、经济地筛选出CSCWI 阳性克隆。提取该阳性克隆的DNA 并进行BamHI 和Hind 皿双酶切，通过PCR 方法鉴定阳性酶切条带并回
    收，利用TaqDNA 聚合酶的聚合活性和3' 未端转移酶活性，改变该片段使其含有3' 腺爷政(A) 突出末端，与pUCm-T 载体实现了高效连接。阳性噬茵斑克隆及阳性条带的正确性得到测序的验证，表明滤纸吸附- PCR 法和改进的亚克隆方法可正确和高效地应用于PCR 筛选文库和3E克隆。