鸡胚发育早期Sonic Hedgehog在脊髓中的异位表达对形态结构及相关蛋白表达的影响

摘要 : 该文主要分析音猬因子(Sonic Hedgehog, Shh)在鸡胚发育过程中对脊髓形态结构的形成和相关蛋白表达的影响。实验过程采用鸡胚带壳开窗培养技术, 待胚胎发育至第3 d, 将2 μg/μL pCAGGS-Shh和0.25 μg/μL pCAGGS-GFP质粒以1:8浓度混合, 将0.1~0.5 μL混合液准确地注射到神经管, 在电压18 V、每次脉冲60 ms、间隔100 ms、电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因, 电转后6 h开始到5 d分别收集胚胎, 冰冻切片, 采用荧光免疫组化和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果表明, 电转后6 h便可以观察到GFP的表达, 24 h时Shh在脊髓中的异位表达能够诱导转录因子Nkx2.2(NK2 homeobox 2)的表达, 并且能够抑制Pax7(paired-type homeobox 7)的表达, 而Shh异位表达时脊髓的结构发生了明显的改变; 说明Shh作为脊髓发育过程重要的信号分子, 其异位表达能够诱导和抑制相关蛋白的表达, 影响脊髓正常发育。