HCV NS3/4A基因外来表达对Huh7细胞凋亡及HCV NS3/4A基因外来表达对Huh7细胞凋亡及

任来峰^1,3* 唐子执² 吴惠文³ 许宁³ 刘刚² 曾鸣² 郭莲娣^2*

¹山西医科大学汾阳学院医学检验系, 汾阳 032200; ²四川大学华西第二医院发育与干细胞研究所, 成都 610041;³山西省汾阳医院肿瘤科, 汾阳 032200

摘要 : NS3/4A是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)编码的丝氨酸蛋白酶复合体, 是病毒完成自身复制周期的必要成分。该研究为调查NS3/4A对细胞凋亡及DNA损伤应答(DNA-damage response, DDR)的影响, 在Huh7细胞中表达了外来NS3/4A基因。通过DAPI染色和MTT分析显示, 外来表达NS3/4A显著诱导细胞的凋亡和增殖活力的下降。免疫荧光检测结果表明, NS3/4A可明显增加细胞内源性DNA双链断裂(double strand breaks, DSBs)损伤(γH2AX灶点升高); 而进一步用X-ray诱导细胞外源性DSBs损伤后, 外来表达NS3/4A的细胞显示出明显的DSBs损伤修复缺陷(减缓的γH2AX灶点消退)。免疫印迹法检测结果显示, NS3/4A可抑制喜树碱(Camptothecin, CPT)诱导的ATM第1 981位丝氨酸的磷酸化(pATM1 981)。以上结果提示, NS3/4A基因外来表达可引起细胞DNA损伤, 抑制ATM介导的DSBs损伤修复信号, 诱导细胞凋亡通路的活化。