双分子荧光互补系统分析S-periaxin蛋白的聚合

摘要 : S-periaxin蛋白是施旺氏细胞特异性表达的一种蛋白, 在维持髓鞘的稳定方面发挥重要作用, 该蛋白基因的突变引起腓骨肌萎缩症4F亚型的发生。Periaxin基因由于mRNA剪切方式的不同可以编码两种长短不同的含PDZ结构域的蛋白, 即L-periaxin和S-periaxin。两种蛋白在施旺氏细胞的定位存在明显的差异, 相对L-periaxin而言, S-periaxin无论是分子结构还是生物学功能均未见相关研究。该文从大鼠的施旺氏细胞系RSC96克隆了S-periaxin基因, 构建了原核表达载体pET-M-3C-S-periaxin, 在大肠杆菌中进行重组表达, 经Ni-NTA亲和柱和Sephacryl S-200凝胶层析柱获得电泳纯的目的蛋白。体外戊二醛交联分析蛋白的聚合状态表明, S-periaxin蛋白在体外易于形成不同聚合度的聚合物。免疫共沉淀也表明, S-periaxin蛋白存在同源蛋白间相互作用。另外, 构建了原、真核双分子荧光互补系统, 并利用该系统分析了细胞内S-periaxin蛋白间的相互作用。