初断乳大鼠视网膜微血管周细胞的分离培养

杨密清^1# 刘光辉^2# 王航¹ 黄陈稳³ 郑永征² 任秉仪² 周子鑫² 杨巍¹ 纪斌峰¹ 孟春^1*

¹福州大学生物科学与工程学院, 福州 350108; ²福建中医药大学附属人民医院, 福州 350004; ³同济大学生命科学与技术学院, 上海 200092

摘要 : 探讨、优化初断乳大鼠视网膜微血管周细胞(retinal microvascular pericytes, RMPs)的分离、培养方案。分别从15只初断乳大鼠及15只成年大鼠中剜取眼球, 采用眼科显微手术器械分离获取视网膜, 经碎化、消化、过滤处理, 收集视网膜微血管片段, 予接种培养。MTT法测绘RMPs生长曲线, 通过倒置显微镜观察RMPs形态, 免疫荧光法鉴定周细胞标记物。比较2组之间视网膜分离操作时间、完整性、原代细胞数量、周细胞形态和表面标记物表达。结果显示, 初断乳大鼠视网膜均成功分离, 其中24眼视网膜呈整片分出, 6眼视网膜破裂呈碎片状, 单个眼球视网膜分离时间为14.3~45.5 s。视网膜分离操作时间及完整性与成年大鼠差异无统计学意义(P>0.05), 初断乳大鼠原代RMPs细胞产量较成年大鼠高, 细胞增殖能力强, 细胞形态及表面标记物与成年大鼠一致。研究结果表明, 初断乳大鼠视网膜是一种可用于RMPs培养的良好组织原料, 该实验成功建立了初断乳大鼠RMPs分离培养体系。