转MSTN干扰载体细胞株的获得及外源基因整合情况的研究

摘要 : 转基因细胞株的建立能够为转基因体细胞克隆技术奠定重要基础。该实验利用MSTN干扰载体, 转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞, 获得5个相应的转基因单克隆细胞株。采用RealtimePCR和高效热不对称互交式PCR(hiTAIL-PCR)技术检测细胞克隆中MSTN表达载体的拷贝数及其在牛基因组中的整合位点。结果表明, 荧光定量PCR有效检测到5个细胞克隆中质粒的拷贝数分别为2.26±0.32、1.52±0.25、25.68±1.02、8.43±0.73和6.72±0.10。hiTAIL-PCR对整合位点的检测结果表明, 质粒片段在插入到基因组的过程中进行了重组, 其与基因组的结点处有2或4个共同的碱基序列。该研究探索MSTN干扰载体在牛胎儿成纤维细胞中的整合机制, 以期获得遗传背景清楚的转基因细胞作为体细胞核移植的重要材料, 为高产转基因肉牛新品种的培育提供重要的理论和实验基础。