红花花青素合成酶基因的克隆及表达分析

刘秀明^1,2 杨文婷^1,2 赵利旦^1,2 董园园¹ 姚娜¹ 王南¹ 官丽莉¹ 李海燕^1,2* 李校堃^1*

¹吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心, 长春 130118; ²吉林农业大学生命科学学院, 长春 130118

摘要 : 根据红花转录物测序结果中得到的中间序列, 采用RT-PCR和RACE方法从红花花瓣中克隆到1个ANS基因的全长cDNA, 该基因全长序列1 226 bp, 具有完整的开放阅读框(ORF), 共1 050 bp, 编码349个氨基酸。生物信息学软件分析显示, 该基因编码的蛋白理论分子量约为82.27 kDa, 等电点为5.09, 序列里含有典型的加尾信号序列AATAA和Poly(A)。保守结构域预测表明, 该基因编码的蛋白具有典型的ANS蛋白功能结构域, 其保守结构域中含有铁离子及2-O-酮戊二酸结合位点。结合其他物种的ANS基因构建系统树表明, 红花ANS基因与其他物种氨基酸具有一定的同源性, 其中与芍药的亲缘关系最近。应用实时荧光定量PCR分析表明, ANS基因在红花的初花期和盛花期的表达量最高。