SPARC基因过表达对SKM-1细胞凋亡的影响

摘要 : 构建SPARC基因过表达载体, 转染人骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome, MDS)细胞系SKM-1细胞, 探讨SPARC基因过表达对人MDS细胞系SKM-1细胞凋亡的影响。以pcDNA-SPARC为引物, PCR扩增SPARC基因; 将靶基因克隆入慢病毒载体pGC-GV, 构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC, 测序检测正确性; 将构建载体pGC-GV-SPARC转染人MDS细胞系SKM-1, 流式细胞术检测转染效率, RT-PCR检测SKM-1细胞中SPARC mRNA表达, Western blot检测SPARC 蛋白表达, MTS法测定小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)对实验组增殖抑制的影响, Annexin V检测SPARC基因转染后对人SKM-1细胞凋亡的影响。结果显示, 构建含有SPARC基因的重组慢病毒载体pGC-GV-SPARC转染效率为(64.25±1.42)%; 转染后, SPARC mRNA及蛋白表达在靶细胞中较对照组增多。小剂量阿糖胞苷对转染组的增殖抑制率明显高于其他组。SPARC基因转染后人SKM-1细胞凋亡率较未转染组明显增高, 加入阿糖胞苷后人SKM-1细胞凋亡率较对照组明显增高。 由此说明, 作者成功构建了携带人SPARC基因的慢病毒载体, 转染人SKM-1细胞系后稳定表达SPARC基因, SPARC过表达可抑制细胞增殖, 且联合小剂量阿糖胞苷(30 ng/mL)更有效地抑制SKM-1细胞的增殖, 并诱导其凋亡。