硫酸酯化马尾松花粉多糖对小鼠脾脏B淋巴细胞免疫调节作用的研究

摘要 : 研究60%乙醇提取的马尾松花粉多糖组分D(PPM60-D)及其硫酸酯化物(SPPM60-D)对小鼠脾脏B淋巴细胞增殖、细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)及抗体生成的影响。水煮醇沉法提取得到粗多糖, 乙醇分级沉淀得到60%乙醇沉淀多糖PPM60, Sephacryl S-400HR分离纯化得到多糖组分D, 用氯磺酸–吡啶法对组分D进行硫酸酯化, 尼龙毛法分离B淋巴细胞, MTT法测定其增殖, 荧光分光光度计测定B淋巴细胞[Ca2+]i, 溶血空斑实验(PFC)和定量溶血分光光度(QHS)法测定B细胞抗体生成情况。结果显示, SPPM60-D相对于PPM60-D能更显著地提高B淋巴细胞的增殖以及[Ca2+]i(P<0.01); 经TAK-242、LY294002、U73122、低分子肝素、维拉帕米和2-APB抑制剂作用后, 均可抑制SPPM60-D和PPM60-D所致的[Ca2+]i升高(P<0.05或P<0.01); PFC和QHS检测证实, SPPM60-D对于促进B淋巴细胞的分化及抗体的生成有显著作用, 而PPM60-D的作用较弱。以上研究表明, PPM60-D经过硫酸酯化改性后, 活性明显提高, 推测SPPM60-D可与B淋巴细胞上TOLL样受体4(TLR4)结合, 通过TLR4-PI3K-PLC-IP3R信号通路使钙库释放激活的钙通道(CRAC)打开, 从而使[Ca2+]i升高来激活B淋巴细胞, 进而提高其体外增殖和抗体生成能力。