c-Myc对诱导性多能干细胞的诱导效率及全能性影响的研究

摘要 : 该研究探讨转录因子c-Myc对多能诱导干细胞(induced pluripotent stem cells, iPS)诱导效率及形成的iPS克隆全能性的影响。将Yamanaka四因子(Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc, OSKM)和不含c-Myc的三因子(OSK)病毒分别感染OG2小鼠成纤维细胞(mouse embryo fibroblast, MEF), 诱导成为iPS细胞, 通过计数iPS克隆形成数目和流式细胞仪分析iPS克隆的绿色荧光蛋白(GFP)阳性比例, 比较OSKM和OSK诱导iPS的效率。分别挑取三株OSK和OSKM诱导的iPS克隆, 采用荧光定量PCR法、碱性磷酸酶(AP)染色法和免疫荧光法检测iPS克隆的干性相关蛋白的表达; 采用畸胎瘤实验、嵌合体形成实验和四倍体补偿实验检测iPS克隆的全能性。结果显示: 在该实验室诱导体系里, OSK病毒感染MEF后形成的iPS克隆数目明显增多, GFP阳性克隆的比例增加。OSK和OSKM诱导iPS克隆的干细胞基本特征, 包括形态、AP染色、干细胞特异性基因表达、三胚层形成均没有明显差异。然而, OSK诱导iPS克隆在形成嵌合体小鼠的全能性评估实验中的阳性比例高于OSKM克隆, 且只有OSK克隆株能够获得生殖系传递小鼠和四倍体补偿小鼠。该研究表明, 在实验诱导体系里去除c-Myc的三因子OSK诱导iPS的效率显著高于OSKM四因子, 且三因子诱导iPS克隆具有更好的全能性。