上调hMLH1基因表达对卵巢癌药物敏感性的影响

摘要 : 构建携带错配修复基因hMLH1编码序列全长的真核表达质粒pCAN-hMLH1, 并探讨其对卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用。应用基因重组技术将pET28-hMLH1中的目的基因hMLH1定向克隆到真核表达载体pCAN, 经酶切及测序鉴定; 分别将pCAN-hMLH1和空质粒pCAN转染进卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP, 同时以对顺铂敏感的SKOV3细胞和未转染的SKOV3/DDP细胞作为对照; 应用RT-PCR和Western blot检测转染前后细胞内hMLH1 mRNA和蛋白的表达变化; 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染前后SKOV3/DDP细胞对顺铂敏感性的变化; Hoechst染色检测转染前后细胞的凋亡。结果提示: pCAN-hMLH1重组质粒经酶切及测序鉴定, 表明真核表达质粒构建正确; 采用脂质体法转染SKOV3/DDP细胞后, RT-PCR和Western blot检测到耐药细胞内hMLH1的表达增强; MTT结果显示转染重组质粒后SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性显著增加; Hoechst染色观察到转染后耐药细胞的凋亡明显增强。该研究成功构建了pCAN-hMLH1重组质粒, 在SKOV3/DDP细胞中进行表达, 并能增强耐药细胞对顺铂的敏感性, 促进耐药细胞的凋亡。