构建MicroRNA-29a和microRNA-29c腺病毒并探讨其对膀胱癌细胞增殖能力的影响

摘要 : 构建miRNA-29a/c的重组腺病毒并观察其对膀胱癌T24细胞增殖能力的调控。以人全基因组DNA为模板, PCR扩增miR-29a、miR-29c, 克隆至腺病毒穿梭载体pAdtrace-TO4-CMV。重组穿梭载体经pme I线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183, 通过同源重组获得重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c, pac I线性化后转染HEK-293细胞, 进行包装和扩增。实时荧光定量PCR检测感染腺病毒的膀胱癌T24细胞中miR-29a、miR-29c的表达水平, 并利用CCK-8实验检测细胞增殖能力。经DNA测序和限制性内切酶分析显示, 重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c构建成功; 感染腺病毒Ad-miR-29a和Ad-miR-29c后, 经实时荧光定量PCR检测, 膀胱癌细胞中miR-29a、miR-29c表达显著增高(P<0.01); 过表达miR-29a/c后的CCK-8实验显示, 细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05)。以上说明已成功构建miR-29a、miR-29c腺病毒, 过表达miR-29a/c可抑制膀胱癌细胞的增殖。