RNAi干扰Shp2基因对K562细胞增殖的抑制效应

王灿蔚¹ 陶崑^1* 齐杰玉¹ 邓一平²

¹重庆医科大学基础医学院免疫学教研室, 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心, 重庆 40016;²重庆医科大学实验中心, 重庆 40016

摘要 : 通过RNA干扰技术沉默蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2基因, 构建重组质粒, 采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法、Western blot、MTT法、流式细胞术(FCM)分别检测转染后K562细胞中bcr/abl融合基因、bcr/abl融合蛋白的表达水平、细胞生长增殖变化及细胞凋亡率, 探索该基因的沉默表达对K562细胞的抑制作用。结果表明, 该实验成功构建出能明显下调Shp2基因及其蛋白表达的重组质粒, 转染K562细胞后, 其bcr/abl融合基因及融合蛋白水平均明显降低、K562细胞增殖活力被抑制(P<0.05)、细胞凋亡水平上升(P<0.05)。与对照组相比, 其差异具有统计学意义。提示,重组质粒可显著降低bcr/abl基因及蛋白的表达, 抑制K562细胞的生物学效应, 表明在细胞水平沉默Shp2有可能成为治疗慢性粒细胞白血病的有效靶点。