叶酸靶向载顺铂羧甲基-β-环糊精纳米复合物的制备及对鼻咽癌的体外抑制效应

摘要 : 为达到鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)的靶向化疗, 该研究通过酰胺化反应和配位偶联技术制备叶酸(folic acid, FA)分子靶向载顺铂(cisplatin, CDDP)羧甲基-β-环糊精(carboxymethyl-β-cyclodextrin, CM-β-CD)纳米复合物(FA-CM-β-CD-CDDP), 采用邻苯二胺(o-phenylenediamine, OPDA)比色法检测复合物中CDDP含量, 紫外分光光谱检测FA含量, 透射电镜观察复合物形态, 激光粒度仪测定复合物粒径大小。荧光显微镜观察NPC叶酸受体(folate receptor, FR)阳性HNE-1细胞及FR阴性CNE-2细胞对偶联FITC的复合物的吞噬及OPDA比色法检测细胞内CDDP的浓度。通过MTT法、集落形成实验和流式细胞术检测复合物对HNE-1细胞增殖能力和凋亡的影响。研究结果显示, 复合物中偶联的FA和CDDP浓度分别为340 μg/mL和2 mg/mL, CDDP包封率达20.00%, 复合物粒径均匀且大小为157.8 nm。HNE-1细胞内见较多FITC, 细胞内CDDP浓度为6.24 ng/mL, 而CNE-2细胞内FITC较少, 细胞内CDDP浓度仅约2.01 ng/mL。HNE-1生长抑制率在24 h明显高于对照组(CM-β-CD-CDDP), 其IC50(4.80 μg/mL)明显低于对照组(6.97 μg/mL), 但当所载的CDDP终浓度达到16.00 μg/mL时, 两组抑制率均达到80%以上; 作用48 h两组抑制率无明显差异。在24 h, 当复合物的CDDP终浓度为1.00 μg/mL时, HNE-1的集落形成率为33.21%, 明显低于对照组(52.27%)。当复合物的CDDP终浓度为0.25 μg/mL和1.00 μg/mL时, HNE-1的凋亡率分别达12.65%和22.35%, 明显高于对照组(6.91%和14.21%)。研究结果表明, 成功构建的FA-CM-β-CD-CDDP纳米复合物能够靶向抑制FR阳性的NPC细胞增殖并促进其凋亡。