向日葵单染色体显微分离及特异文库的构建

孙瑞芬¹ 闫素丽^1,2 安玉麟^1*

¹内蒙古农牧业科学院生物技术研究中心, 呼和浩特 010031; ²内蒙古农业大学农学院, 呼和浩特 010019

摘要 : 采用玻璃针分离法, 通过显微操作系统成功地分离到内葵杂3号三交种和单交种的随体染色体, 经两轮LA-PCR扩增得到250~1 500 bp的DNA片段。用各自的基因组DNA标记成探针, 与随体染色体扩增产物进行Southern杂交, 显示杂交信号, 证明内葵杂3号三交种和单交种随体染色体DNA已被成功扩增。将第2轮PCR产物构建质粒文库, 得到三交种和单交种克隆数分别约为2.26×105和2.57×105。各随机挑取30个重组子进行分析, 发现插入片段大小分别为200~700 bp和200~500 bp, 平均插入片段大小分别为535 bp和480 bp。这是染色体微分离与微克隆技术首次在向日葵上的应用。