CFP荧光蛋白文库构建及FRET技术筛选钙调素结合蛋白

孟凡力^1,2 关珊¹ 刘晓进¹ 李朝军^3*

¹南京师范大学生命科学学院, 南京 210023; ²南京医科大学基础医学院, 南京 211166;³南京模式动物研究所, 江苏省分子医学生物技术重点实验室, 南京大学医学院, 南京 210093

摘要 : 钙调素(Calmodulin, CaM)是细胞内Ca2+信号的主要受体, 能够与靶蛋白相互结合调节靶蛋白的活性, 在细胞增殖、分化、凋亡、迁移等过程中都起着重要作用。荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)技术是目前研究蛋白质相互作用比较成熟的方法之一。作者通过Cre-loxP位点特异性重组技术构建了带有CFP荧光蛋白标记的文库, 与YFP-CaM共同转染HEK293细胞, 应用荧光共振能量转移技术(FRET)进行检测, 挑取发生FRET作用的单个细胞, 并进行单细胞PCR检测。由此扩增出的片段通过测序和蛋白序列数据库NCBI进行序列比对后, 筛选出与CaM产生相互作用的蛋白。目前, 已经通过这种方法成功地筛选到了一些与CaM相结合的蛋白, 从而为进一步研究CaM蛋白在生理环境下的作用提供有利条件。