RhoA蛋白对结核杆菌侵袭A549细胞的影响

邵圣文¹ 周洪昌¹ 徐伯赢¹ 张慧¹ 薛利军^2*

¹湖州师范学院医学院创新实验室, 湖州 313000;
²南京军区南京总医院肿瘤内科, 南京 210002

摘要 : 探讨结核杆菌(mycobacterium tuberculosis, MTB)侵袭A549细胞过程中RhoA蛋白功能。构建靶向RhoA基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体si-RhoA, 转染A549细胞, 36 h后进行MTB黏附和侵袭细胞实验, 蛋白印迹法(Western blot)检测RhoA蛋白表达水平, 电镜观察细胞超微结构改变, 激光共聚焦显微镜观察细胞微丝骨架变化并计算F-actin重排指数, 定量PCR法测量细胞黏附和内吞的MTB数量。结果显示, si-RhoA转染A549细胞后, RhoA蛋白表达下降84.7%, 细胞对MTB的黏附能力未改变。MTB侵袭细胞实验显示, si-RhoA转染组细胞F-actin重排指数和内吞细菌数量分别是(63.0±3.1)%和(3.19±0.26)×103拷贝, 无关siRNA组分别是(84.5±1.8)%和(4.45±0.29)×103拷贝, 前者均少于后者(P<0.01)。由此可见, 结核杆菌侵袭A549细胞需要RhoA蛋白参与, 可能通过“拉链”机制介导结核杆菌侵袭非吞噬细胞。