Cameleon测钙系统在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用

张四洋¹ 于淼¹ 高建¹ 邱雪杉² 崔泽实^1*

¹中国医科大学实验技术中心, 沈阳 110001; ,
²中国医科大学病理学教研室, 沈阳 110001

摘要 : 观察Cameleon测钙系统在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用, 实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i), 并探讨[Ca2+]i与细胞凋亡和Pyk2磷酸化的关系。采用Ca2+指示器Cameleon YC3.6转染A549细胞, 24 h后用50 mmol/L H2O2刺激细胞, 激光扫描共聚集显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用Western blot检测H2O2刺激的细胞中Pyk2-tyr402磷酸化水平。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果发现, 在H2O2作用下, A549细胞胞浆内游离[Ca2+]i迅速升高,同时Pyk2-tyr402磷酸化水平显著升高(P<0.05), 凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01)。因此, H2O2促进A549细胞内Ca2+释放, 可能通过活化Pyk2诱导细胞凋亡。