丹参诱导鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞优化方案及电生理研究

胡琳燕¹　余加林^1*　刘官信^1,2　陈波曼³　李　芳¹　李禄全¹　钟海英^1,2

重庆医科大学附属儿童医院, ¹新生儿科, ²儿科医学研究所中心实验室, 重庆400014; ³浙江大学医学院附属妇产科医院新生儿科, 杭州310006

摘要 : 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells， MSCs)，采用丹参对4~5代MSCs进行反复多次诱导分化及再分化，将其诱导分化为神经样细胞，倒置显微镜下连续观察形态学变化，通过免疫荧光细胞化学检测神经样细胞巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白 (neurofiliament， NF)、突触(小)泡蛋白(synaptophysin) 的表达，采用细胞膜电位特异的荧光探针DiBAC4(3)标记细胞，激光扫描共聚焦显微镜动态监测细胞受高钾刺激前后的荧光强度变化，观察细胞电生理反应。结果显示: MSCs第1次经过丹参诱导2 h后， MSCs伸出突起，向神经性细胞形态转变，此时巢蛋白表达率为(95.1±2.1)% (x±s， n=3)，基本不表达NF; 随着诱导分化及去分化过程的次数增加，细胞分化为神经样细胞的时间缩短，突起拉长并交互缠绕呈复杂网状， MSCs第4次经过丹参诱导1 h后， NF表达率(95.3±1.6)% (x±s， n=3)，并表达突触(小)泡蛋白， 5 h后突触(小)泡蛋白表达更为广泛; 激光共聚焦扫描显微镜显示第4次诱导5 h后的细胞在高钾刺激下发生去极化，胞内荧光强度瞬时增强，而MSCs空白对照对高钾刺激无反应。本优化诱导方案可以高效率地诱导MSCs分化为具有电生理特性的神经样细胞。