乳腺癌细胞中MRJ稳定干扰导致MMP-9表达增强和细胞骨架重排
彭娜娜1 庄红芹1 王 耀2* 华子春1*
1南京大学医药生物技术国家重点实验室, 南京 210093;2新南威尔士大学圣乔治医学院, 悉尼, 新南威尔士州 2217, 澳大利亚
摘要 : 应用构建稳定乳腺癌细胞系的方法研究MRJ干扰后上调乳腺癌细胞中基质金属蛋白酶MMP-9的表达, 并影响细胞骨架的重排。为了探讨MRJ(S)与MMP-9和细胞骨架的关系, 将MDAMB-231细胞转染干扰质粒pRNAT-U6.1/neo-MRJsi, 用G418(Zeocin)(600 μg/mL)筛选得到MRJ(S)稳定干扰的细胞系, 命名为MDA-MB-231/MRJsi。利用Q-PCR和Western blot检测MDA-MB-231/
MRJsi细胞和野生型细胞之间MRJ mRNA水平和蛋白水平的差异。利用鬼笔环肽染色和anti-α-tublin的免疫荧光分析观察MDA-MB-231/MRJsi细胞系中微丝和微管的变化。同时, 利用明胶酶谱法检测MDA-MB-231和MDA-MB-231/MRJsi细胞系中基质金属蛋白酶MMP-9的酶活性变化并进一步利用Q-PCR检测MRJ干扰后细胞内MMP-9的mRNA水平差异。结果表明, 成功构建MRJ稳定干扰的MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系, 与野生型MDA-MB-231细胞比较, MDA-MB-231/MRJsi细胞系中MRJ mRNA水平下降了50%(P<0.05), MRJ(S)蛋白表达水平下调70%; 细胞骨架微丝和微管发生重排; MMP-9酶活性增强; MMP-9的mRNA水平显著上升(P<0.01), 与其酶活性水平变化一致。该文MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系提供了一个研究MRJ(S)与乳腺癌发生发展的细胞模型;MRJ(S)可以影响MDA-MB-231细胞中MMP-9的表达并引发细胞骨架重排。
MRJsi细胞和野生型细胞之间MRJ mRNA水平和蛋白水平的差异。利用鬼笔环肽染色和anti-α-tublin的免疫荧光分析观察MDA-MB-231/MRJsi细胞系中微丝和微管的变化。同时, 利用明胶酶谱法检测MDA-MB-231和MDA-MB-231/MRJsi细胞系中基质金属蛋白酶MMP-9的酶活性变化并进一步利用Q-PCR检测MRJ干扰后细胞内MMP-9的mRNA水平差异。结果表明, 成功构建MRJ稳定干扰的MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系, 与野生型MDA-MB-231细胞比较, MDA-MB-231/MRJsi细胞系中MRJ mRNA水平下降了50%(P<0.05), MRJ(S)蛋白表达水平下调70%; 细胞骨架微丝和微管发生重排; MMP-9酶活性增强; MMP-9的mRNA水平显著上升(P<0.01), 与其酶活性水平变化一致。该文MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系提供了一个研究MRJ(S)与乳腺癌发生发展的细胞模型;MRJ(S)可以影响MDA-MB-231细胞中MMP-9的表达并引发细胞骨架重排。
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