胰腺癌曲古霉素A耐药细胞株转移相关基因表达的研究

刘彪¹ 陈孝倩² 张翠² 王本泉¹ 白永恒² 王斯璐² 金嵘¹ 周蒙滔¹ 陈必成^1,2*

¹温州医学院附属第一医院肝胆胰外科, 温州 325000;
²温州医学院附属第一医院外科实验室, 温州 325000

摘要 : 该实验旨在探讨曲古霉素A(trichostatin A, TSA)对胰腺癌PANC-1细胞株侵袭转移力的影响。分别通过短时间低浓度TSA(0.1~0.2 μmol/L)处理胰腺癌细胞株PANC-1 24 h, 以及长期低浓度递增法建立TSA耐药株(PANC-1-TSA)。采用CCK8(cell counting kit-8)测得PANC-1、 PANC-1-TSA的IC50分别为(0.51±0.09) μmol/L、 (78±5) μmol/L, 耐药株耐药指数为153。Transwell侵袭小室实验显示, 0.1 μmol/L TSA处理后, 胰腺癌PANC-1细胞侵袭力未见明显改变, 而耐药株PANC-1-TSA侵袭力较亲本株明显增强。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)结果显示, 耐药株PANC-1-TSA转移相关基因MMP1/2/7/9/14/15及TIMP1/2 mRNA的表达均明显上升, 尤以MMPs mRNA明显。在倒置显微镜观察到耐药细胞形态上发生上皮型向间叶型转化(epithelial mesenchymal transition, EMT), 进一步通过RT-qPCR及蛋白免疫印迹(Western blot)实验证实耐药株发生EMT, 其中上皮型标志物表达下降及间叶型标志物表达上升。该实验显示, 耐药细胞株PANC-1-TSA侵袭力增强, 侵袭、转移相关基因表达明显增加。耐药株形成的过程中, 发生上皮–间叶转化(EMT), EMT可能参与了胰腺癌PANC-1-TSA细胞株侵袭能力的增强。