DNMT3a表达上调与A549细胞对顺铂耐受关系的实验探究

摘要 : 基因甲基化状态改变是肿瘤获得性耐药产生的重要途径之一。DNMTs是基因甲基化的重要调节因子。为了寻找预测肺腺癌A549细胞对顺铂敏感性的生物标志, 该研究以A549细胞和对顺铂耐受的同源A549细胞(A549-DDP)为研究对象, 利用质粒转染技术上调A549细胞DNMT3a表达, 通过RT-PCR检测转染前后DNMT3a在mRNA水平的表达情况。在不同浓度顺铂作用下, 通过MTT法、克隆形成实验检测转染前后细胞增殖率并计算IC50和计数细胞克隆形成数。在相同顺铂浓度作用下, 流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡分数的改变。结果显示: 顺铂作用24 h后, 转染DNMT3a表达质粒的A549细胞对顺铂IC50明显高于A549细胞[(9.19±0.91) μmol/L vs (4.96±0.58) μmol/L, P=0.000], 转染后的细胞凋亡率明显低于未转染细胞[(1.33±0.38)% vs (5.22±0.67)%, P=0.039]; 不同浓度顺铂连续作用5 d后, 转染DNMT3a表达质粒的A549细胞形成的克隆数均明显高于A549细胞组。结果提示, DNMT3a表达上调是肺腺癌A549细胞对顺铂获得性耐受的重要原因之一。检测肺癌患者血清DNMT3a水平作为预测肺癌患者对顺铂敏感性的生物标志值得进一步研究。