靶向LOX-1基因RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

摘要 : 该研究针对LOX-1基因(OLR1)设计并合成3条siRNA干扰序列, 与双酶切的U6-vshRNA-CMV-GFP慢病毒载体连接得到重组载体, 包装慢病毒并测定滴度。采用最佳MOI值及转染条件, 转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVEC), 转染96 h后通过RT-PCR和Western blot检测LOX-1 mRNA及蛋白的表达, 流式细胞仪检测转染后ox-LDL诱导HUVEC的凋亡情况。测序证实靶向LOX-1 RNAi慢病毒载体构建成功; RT-PCR和Western blot结果显示转染后LOX-1 mRNA及蛋白均受到不同程度抑制(P<0.05); 流式检测结果显示抑制LOX-1表达后ox-LDL诱导HUVEC凋亡显著减少(P<0.05)。该研究应用RNAi技术成功构建LOX-1 RNAi慢病毒载体, 有效抑制了LOX-1的表达, 显著减少了ox-LDL诱导的凋亡, 为进一步研究LOX-1基因沉默减轻内皮细胞损伤及相应保护机制奠定了基础。