考马斯亮蓝凝胶染色联合近红外成像用于双向电泳前的蛋白质定量

曹嵩^1,2 邓文文² 朱欣婷² 胡姗姗² 喻田¹ 刘云^1,2*

¹遵义医学院贵州省麻醉与器官保护基础研究重点实验室, 遵义 563099;²遵义医学院医学与生物学研究中心, 遵义 563099

摘要 : 双向电泳的蛋白质定量由于存在试剂兼容性的问题, 常常需要使用GE或Bio-Rad公司专用的蛋白质定量试剂盒。这类试剂盒价格昂贵且实验操作繁琐, 亟待建立一种准确、快速且廉价的双向电泳蛋白质样品的定量方法。不同浓度的蛋白质样品经十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)产生的蛋白质条带, 经考马斯亮蓝(CBB)染色后能被近红外光激发出不同强度的荧光。利用这一性质, 以牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白质定量的标准品, 使用Odyssey近红外荧光扫描成像系统绘制标准曲线用于双向电泳蛋白质样品的定量。实验结果表明, 使用“700 channel”,在1~10 μg的范围内, 蛋白量与荧光强度表现出良好的线性和可重复性。因此, 基于Odyssey近红外成像的考染凝胶定量的方法是一种精确快速可用于双向电泳蛋白质定量的方法。