shRNA靶向干扰COX-2稳定细胞系的建立及鉴定

摘要 : 脂质体法将COX-2-shRNA载体转染肝癌细胞株SMMC-7721, G418筛选获得稳定细胞系COX-2-shRNA-SMMC-7721, 通过RT-PCR和Western blot分别检测细胞系中COX-2基因mRNA转录水平和蛋白质表达水平, 通过MTT、流式细胞术和Transwell等观察细胞恶性生物学行为的改变。建立COX-2-shRNA-SMMC-7721(干扰组)、HK-SMMC-7721(阴性对照组)细胞株。干扰组的COX-2基因mRNA的转录水平、蛋白表达水平和细胞增殖能力较阴性对照组和SMMC-7721(空白组)明显下降(P<0.05), 而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05); 干扰组、阴性对照组和空白组处于G0/G1期的细胞分别为(68.85±0.27)%、(53.05±0.35)%和(53.54±0.33)%; 细胞凋亡率分别为(9.60±0.20)%、(1.79±0.23)%和(1.75±0.20)%; 穿膜细胞数分别为(117.60±5.30)、(338.40±11.50)和(347.40±12.80)个。干扰组与阴性对照组和空白组有显著差异(P<0.05), 而阴性对照组与空白组间无明显差异(P>0.05)。利用RNA干扰技术成功构建了靶向干扰COX-2的稳定肝癌细胞系COX-2-shRNA-SMMC-7721, 为COX-2分子的作用机制研究提供了细胞模型。