香鱼CCL4-like基因的克隆、序列分析及免疫相关性表达变化分析

摘要 : CC型趋化因子是一种多功能的趋化因子, 是鱼类先天免疫系统的重要组成部分。该研究通过文库测序方法获得香鱼(Plecoglossus altivelis, ayu) CCL4-like(aCCL-like)基因cDNA序列。它编码一个由123个氨基酸组成的前肽, N-端22个氨基酸为信号肽序列。成熟肽包含4个半胱氨酸残基, 可形成2个二硫键。系统进化树分析揭示, aCCL4-like与大西洋鲑(Salmo salar, atalanticsalmon) CCL4亲缘关系最近。实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)分析揭示,aCCL4-like基因mRNA在检测的健康香鱼7个组织中均有表达, 其中肝的表达量最高; 在鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)感染后, 各组织中aCCL4-like基因mRNA表达均显著变化, 但各时间点变化不一，其中肠组织的变化最为明显。随后原核表达了aCCL4-like并制备相关抗血清, Westernblot分析揭示, 鳗利斯顿氏菌注射后4 h的血清中CCL4-like含量无显著变化, 8 h时显著增加, 此后表现为持续增加。综上, aCCL4-like基因的表达变化与鳗利斯顿氏菌的感染过程密切相关, 推测aCCL4-like可能在香鱼抗病原菌感染的免疫反应过程中有重要作用。