外源性miR-34a抑制H1299细胞生长的机制研究

段广新¹ 段卫明² 许雅香¹ 张燕娟³ 周新文^3*

¹苏州大学医学部基础医学与生物科学学院, 苏州 215123; ²苏州大学附属第一医院, 苏州 215123; ³苏州大学医学部放射医学与防护学院, 苏州 215123

摘要 : 将合成的miR-34a成熟序列转染p53–/–的非小细胞肺癌H1299细胞, 探究外源性的miR-34a是否影响p53缺失细胞的生长、凋亡和衰老以及其作用机制。MTT检测细胞的生长与存活, 藻红B染色检测细胞的死亡, Annexin V/PI染色检测细胞凋亡, β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞的衰老, Western blot检测与细胞凋亡和周期相关的Bcl-2、Puma、Cdk4和E2F3蛋白的表达。结果显示,miR-34a转染组和阴性对照组相比, 存活率明显降低, 且48 h较24 h更显著, 24 h和48 h存活率分别为79.94%、64.83%; 细胞死亡和凋亡的分析结果表明, 外源性miR-34a可以促进细胞死亡和凋亡; 此外,细胞还出现了明显的衰老, 并且检测到凋亡、衰老相关的Bcl-2、Puma、E2F3和Cdk4蛋白的表达下调。miR-34a可以下调p53下游相应靶蛋白的表达, 通过部分补救p53通路或p53非依赖途径促进细胞的凋亡、衰老并抑制细胞的增殖。