RhoB分子靶蛋白MHY9的鉴定

摘要 : 鉴定能与活性RhoB分子结合的靶蛋白。制备GST融合的活性RhoB蛋白(GST-RhoB),与LPS刺激的DC2.4细胞裂解物混合后实施pull-down实验, 沉降复合物通过SDS-PAGE分析、金染色后, 对与GST-RhoB结合的蛋白条带进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析。然后制备小鼠的树突状细胞, LPS刺激12 h后, 进行荧光标记的抗体染色。激光共聚焦显微镜下观察RhoB与MYH9的细胞内定位。通过MALDI-TOF质谱分析, 鉴定到一个新的可以与RhoB的活性形式结合的马达分子MYH9。激光共聚焦显微镜的结果表明, RhoB在LPS刺激前后均与MYH9在树突状细胞内共定位。该研究首次发现MYH9可与活性RhoB结合, 可能是RhoB下游的一个靶蛋白。