几丁质酶结构域内含蛋白1(Chid1)基因剔除小鼠的建立

摘要 : 建立几丁质酶结构域内含蛋白1(chitinase domain containing 1, Chid1)基因剔除小鼠,观察小鼠表型和发育差异。设计了合适的基因剔除策略, 成功构建了基因剔除打靶载体。以电穿孔方法将打靶载体导入ES细胞(embryonic stem cell), 用G418和Ganciclovoir进行正负筛选, 挑选抗药的阳性克隆, 提取ES细胞基因组DNA, 用长臂PCR鉴定出阳性ES细胞。将阳性ES细胞复苏培养后注入小鼠囊胚, 获得嵌合体小鼠。嵌合体小鼠与C57BL/6J小鼠交配后获得Aguoti毛色的杂合子小鼠。在雌雄杂合子交配的后代中获得纯合子小鼠。从脑、脾脏、肝、肺的RNA水平鉴定来看,基因剔除小鼠的Chid1基因未表达, 而杂合子、野生型小鼠有明显的该基因条带。经过初步的表型观察发现, Chid1基因剔除小鼠发育正常, 未出现胚胎致死, 交配繁殖能力无异常。几丁质酶结构域内含蛋白1(Chid1)基因剔除小鼠模型建立成功。Child1基因对于小鼠发育、生殖方面无明显作用。