人PRR11核心启动子区域NF-Y结合位点的定点突变分析

翁华莉^1,2 张莹^1,2 艾青^1,2 龙银江^1,2 谢濛宇^1,2 王义涛^1,2 蔡伟^1,2 朱慧芳^1,2* 卜友泉^1,2*

¹重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室, 重庆 400016;²重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心, 重庆 400016

摘要 : PRR11(proline-rich protein 11)是我们最近发现的一个新的肿瘤相关基因, 在细胞周期和肿瘤发生等过程中起重要作用。该研究是在此前对PRR11启动子鉴定分析的基础上, 对PRR11核心启动子区域中的核因子(nuclear factor Y, NF-Y)结合位点进行进一步的分析以确定其在PRR11转录调控中的作用。核苷酸序列同源性分析结果表明, PRR11核心启动子区域中的两个NF-Y结合位点在人、牛、大鼠和小鼠四个物种中均高度保守。共转染NF-Y表达质粒后, 发现NF-Y的外源过表达可以明显提高PRR11的启动子活性。采用定点突变方法将PRR11启动子区域中的两个NF-Y结合位点单独或同时进行有效突变后, PRR11启动子活性明显下降, 且NF-Y外源过表达对其启动子活性的激活效应也明显削弱甚至丧失。另外, 对基因定点突变方法做出了改进, 提出了一种更好的基于转录因子结合位点分析的碱基突变方法。这些结果表明, NF-Y结合位点是PRR11核心启动子区域中的重要的顺式作用元件, NF-Y可能通过调节PRR11的转录进而调节细胞周期和肿瘤发生等过程。