SV40增强子对奶牛β-酪蛋白启动子活性的影响

摘要 : 该文采用重叠PCR方法在奶牛β-酪蛋白启动子(op0)中插入SV40增强子构建重组启动子op0-SV40enh, 并分析其活性。首先PCR扩增op0 5′-端2.1 Kb片段、op0 3′-端1 Kb片段和SV40增强子序列, 重叠PCR拼接三种片段得到插入SV40增强子的op0-SV40enh启动子并测序鉴定后, 酶切连接将其插入pGL3-Basic中的指定克隆位点, 构建重组载体pGL3-op0-SV40enh。将重组载体pGL3-op0和pGL3-op0-SV40enh分别瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞, 采用双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子op0和op0-SV40enh的相对活性。结果显示, 重叠PCR拼接出长度为3.4 Kb的片段, 测序结果与预期结果一致, 表明成功构建了重组载体pGL3-op0-SV40enh; op0-SV40enh启动子的活性远高于op0启动子的活性, 表明奶牛β-酪蛋白启动子中插入SV40增强子序列可显著提高其引导荧光素酶报告基因表达的活性。