Hela细胞HGPRT缺陷型细胞系构建

摘要 : 建立稳定的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷的Hela细胞系, 为细胞融合相关研究和人源化单克隆抗体制备提供有利于筛选的亲本细胞。通过诱变剂N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对Hela细胞进行诱变, 逐步提高培养基中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度, 筛选出对6-TG稳定耐受的细胞, 在次黄嘌呤–氨基喋呤–胸腺嘧啶(hypoxanthine-aminopterin-thymidine, HAT)培养基中鉴定其敏感性, 最后对筛选得到的Hela-HGPRT–进行生物学鉴定。在此基础上, 将Hela-HGPRT–细胞系与人淋巴细胞融合, 在HAT培养基中筛选杂交细胞。筛选得到了能够长期在含20 μg/mL 6-TG培养基中生长的Hela-HGPRT–细胞, 并且在HAT培养基中不能存活。Hela-HGPRT–细胞与人淋巴细胞成功融合, 获得能够连续传代培养的杂交瘤细胞。经MNNG诱导和6-TG筛选,得到了稳定传代的Hela-HGPRT–细胞系, 该细胞系可用于细胞融合相关研究。