抑癌基因NPRL2对肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响

摘要 : 抑癌基因NPRL2(nitrogen permease regulator-like 2)在人类许多正常组织中均有明显
    的表达, 而在人类多种肿瘤组织中的表达明显降低。该实验通过构建重组质粒pEGFP-N1-NPRL2并转染肾癌786-O细胞株, 应用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测NPRL2基因的表达情况; MTT法检测786-O细胞增殖的情况; 流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡情况。结果显示: 肾癌786-O细胞株转染重组质粒pEGFP-N1-NPRL2后, 通过荧光显微镜可以观察到绿色荧光; RT-PCR和Western blot检测到NPRL2基因的转录和蛋白质表达水平明显增加(P<0.05); MTT法检测发现72 h时pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的细胞D490值分别为0.654±0.030、1.528±0.022和1.572±0.036, pEGFP-N1-NPRL2组细胞的增殖较其他两组受到明显的抑制(P<0.05); 流式细胞仪检测显示pEGFP-N1-NPRL2组、pEGFP-N1组和空白对照组的凋亡率分别为18.82%±0.40%、5.65%±0.12%和5.85%±0.07%, 而处于G0/G1期的细胞比例分别为69.80%±1.40%、46.24%±1.30%和47.03%±0.45%, 与其他两组相比, pEGFP-N1-NPRL2组的凋亡率显著增高而且G0/G1期细胞明显增多, 表现出G0/G1期阻滞。提示抑癌基因NPRL2的转染可以抑制786-O细胞的增殖, 并诱导其凋亡将细胞周期阻滞于G0/G1期。