慢病毒介导KCNMA1体外转染大鼠间充质干细胞及功能测定

摘要 : 间充质干细胞具有高度增殖、自我更新和多向分化的潜能。大电导钙离子激活的钾通道M亚族α亚基(potassium large conductance calcium-activated channel, subfamily M, alpha member 1,KCNMA1)介导细胞内K+的外流, 使细胞膜超极化, 降低细胞的兴奋性。该研究通过制备KCNMA1重组慢病毒载体和空白对照慢病毒载体, 将其转染至间充质干细胞内, 测定转染复数值(MOI), 并通过RT-PCR和Western blot比较转染前后KCNMA1的表达变化情况, 检测转染前后细胞微环境中电解质浓度变化。结果成功包装了KCNMA1慢病毒载体和空白病毒载体并转染入干细胞内; 含有目的基因的慢病毒转染间充质干细胞后, RT-PCR和Western blot提示KCNMA1过表达, 且细胞微环境中K+浓度升高。证实成功地将含KCNMA1的慢病毒载体转染进入大鼠间充质干细胞内, 并在细胞内过表达且发挥功能, 为体内研究KCNMA1结合干细胞治疗相关疾病奠定了基础。