乳鼠海马神经干细胞的体外分离、扩增和分化研究

摘要 : 探讨海马神经干细胞(neural stem cells, NSCs)在体外分离扩增和诱导分化的可行性。无菌条件下分离新生(24 h)SD大鼠海马神经干细胞, 采用无血清培养和胎牛血清诱导分化。免疫荧光染色技术分别检测诱导前细胞巢蛋白(Nestin)的表达, 以及分化细胞的神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)的表达, 以鉴定细胞类型。流式细胞仪检测神经干细胞分化前后增殖能力的变化。结果显示: 从乳鼠海马分离培养的细胞生长状态良好, 具有克隆增殖能力, 并呈Nestin表达阳性, 分化后可出现NSE及GFAP表达阳性的细胞。流式细胞仪检测显示: 诱导前, 细胞增殖活跃, S+G2/M期细胞为(36.27±1.99)%,而分化各阶段(3, 7, 10 d) S+G2/M期细胞比例与诱导前(Ctrl)相比则明显下降(P<0.05), 分别为(26.39±1.10)%、(26.33±1.33)%和(24.54±1.12)%。这些结果表明乳鼠海马存在神经干细胞, 并具有自我更新和多向分化的潜能, 可用于基础和临床的相关研究。