绿色荧光蛋白表达载体pXS75-GFP的构建及在嗜热四膜虫中的应用

摘要 : 为获得能够用于构建嗜热四膜虫蛋白定位的载体, 该研究将GFP基因与镉(Cd2+)诱导的四膜虫金属硫蛋白基因(MTT1)启动子序列和终止子序列融合, 获得表达载体pXS75-GFP。通过同源重组和抗性筛选, pXS75-GFP载体携带的目的基因整合入四膜虫MTT1位点, 在Cd2+诱导下实现GFP融合蛋白的可控表达。将α-tubulin基因ATU1克隆入pXS75-GFP中, 重组质粒pXS75-GFPATU1通过基因枪转化入四膜虫细胞, 在巴龙霉素筛选下获得稳定的α-tubulin-GFP过表达细胞株。激光共聚焦显微镜观察α-tubulin-GFP的定位, 结果显示, α-tubulin-GFP融合蛋白在四膜虫细胞中表达并分布于皮层上, 表明pXS75-GFP载体可用于嗜热四膜虫功能蛋白的定位分析。