siRNA干扰小鼠睾丸支持细胞uPA表达的初步研究

摘要 : 该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上, 针对uPA mRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列(si-uPA), 通过瞬时转染TM4细胞, 筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验, 观察siRNA对TM4细胞uPA mRNA和蛋白表达的影响。结果显示, siRNA的最佳转染浓度为50 nmol/L。三种si-uPA转染TM4细胞后, uPA mRNA和蛋白表达量均较空白对照组明显下降(P<0.05), 以si-uPA1作用最为明显。si-uPA1转染24 h后, 转染组细胞uPA mRNA的表达均较对照组显著降低, 其中100 nmol/L组抑制效果最为明显, 抑制率达到70%;随转染时间的延长, uPA mRNA表达持续降低, 转染72 h后, 三组转染细胞uPA mRNA表达量分别为对照组的53.9%、35.3%和27.7%(P<0.05)。该研究成功筛选出针对uPA mRNA靶序列的有效干扰序列,抑制效应持续至72 h; 同一时间点内, 抑制效应随转染浓度的增加而增强, 表现出良好的量效关系。