ATP依赖的人Lon蛋白酶的表达、纯化及其活性鉴定

姚　蔚^1,4#　夏　雷^1,2,3#　刘永章^1,3,4#　黎　真^1,3,4　王　璐^1,2,3　吕　斌^1,2,3,4*

¹温州医学院生物物理研究所, 温州 325035; ²温州医学院Attardi线粒体生物医学研究院, 温州 325035;³浙江省医学遗传学重点实验室, 温州 325035; ⁴温州医学院检验医学与生命科学学院生物系, 温州 325035

摘要 : ATP依赖的人Lon蛋白酶是一种同质寡聚、环状的蛋白酶, 主要位于细胞线粒体基质中。许多研究表明, Lon蛋白酶对于维护细胞的内环境稳定起着重要作用, 并参与线粒体蛋白质量控制和代谢调控。将pPROEX1 His6-Lon重组质粒在Escherichia coli Rosetta 2菌株中诱导表达用Ni2+柱亲和层析法纯化, 获得纯度较高的目的蛋白。经纯化后, Lon蛋白酶的比酶活达到0.17 U/mg。通过多肽底物Rhodamine 110、bis-(CBZ-L-alanyl-L-alanine amide)[(Z-AA)2 Rh110]的降解检测显示,Lon蛋白酶具有肽酶活性, 并被ATP所刺激。Casein和线粒体转录因子A降解实验表明, 纯化的Lon蛋白酶具有蛋白水解活性, 而且蛋白水解活性依赖于ATP。