可诱导的稳定表达Spata3细胞系的建立及特征

傅俊江^1,2,3*　曾卫民^1*　李月红⁴　郭明日¹

¹中南大学生物科学与技术学院生物化学系, 长沙 410013; ²中南大学人类生殖与干细胞工程研究所, 长沙 410078; ³美国贝勒医学院分子与细胞生物学系, 德克萨斯77030; ⁴中南大学职工医院湘雅分院, 长沙 410078

摘要 : spata3是一个在睾丸中特异性表达的基因，可能与精子发生或生精细胞凋亡相关。为了进一步研究Spata3的功能，将spata3克隆入经修饰的pcDNA5/FRT/TO表达载体，应用Flp-InTMT-RExTM-293细胞系作为宿主细胞，成功地构建了可被四环素或Doxycline诱导的稳定表达Flp-InTMT-RExTM-sptat3的细胞系。该细胞系在spata3基因的3'端有2×FLAG tag和2×His tag，在缺乏可利用的spata3或其抗体的情况下，也能够很容易地应用商品化的FLAG抗体检测到spata3全长蛋白的表达。这种可诱导的稳定表达Flp-InTMT-RExTM-spata3的细胞系的建立，不仅有利于spata3的分析鉴定和功能研究，而且对于其他蛋白质的分离纯化和功能研究也有很好的借鉴作用。