重组人IL-18-EGF的双顺反子表达及其对NK细胞和肝癌细胞的影响

摘要 : 构建重组人IL-18-EGF肿瘤靶向分子双顺反子原核表达系统， 研究重组人IL-18-EGF融合蛋白对人自然杀伤细胞(natural killer cell， NK细胞)和人肝癌细胞(SMMC-7721)的影响。构建重组人IL-18-EGF原核双顺反子表达系统pET28a(+)-proIL-18-EGF-Caspase-4/BL21， 重组蛋白经纯化后， 作用于NK细胞， 应用CCK-8法和ELISA试剂盒分别检测NK细胞的增殖情况和IFN-γ的分泌量。Cy3荧光标记IL-18-EGF检测融合蛋白与肿瘤细胞表面EGFR的结合情况。IL-18-EGF与NK细胞共同孵育24 h后， 取培养上清液作用于人肝癌细胞SMMC-7721， 分别使用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测IL-18-EGF对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。实验结果显示: 重组人IL-18-EGF能加快NK细胞的增殖， 促进NK细胞分泌IFN-γ; IL-18-EGF能与肿瘤细胞表面EGFR特异性结合; 细胞划痕实验中， 重组人IL-18-EGF组空白区域的抗填充能力高于对照组; Transwell小室实验中， 12， 24， 48 h时IL-18-EGF组细胞穿膜数分别为94.6±2.9、101.8±4.0和116.2±4.5， 均显著低于相应时间的对照组(分别为128.6±8.5、133.0±7.5和138.8±5.4)(P<0.05)。以上结果表明， IL-18-EGF对人肝癌细胞SMMC-7721的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用， 能提高机体的免疫能力， 有可能作为辅助药物运用于肝癌的治疗。