重组创伤弧菌溶细胞素缬氨酸V201和V289突变对其活性的影响

摘要 : 将重组创伤弧菌溶细胞素A(recombinant Vibrio vulnificus hemolysin， rVvhA)第201位和第289位的缬氨酸定点突变为甘氨酸， 并表达rVvhAval201gly，val289gly突变蛋白。检测突变蛋白与未突变蛋白的溶血活性、对胞内钙离子浓度、钾离子外流及对细胞损伤的影响。结果显示， 与rVvhA相比， rVvhAval201gly，val289gly的溶血活性和细胞毒性均降低， 诱导人类脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells， HUVEC)凋亡、胞内钙离子内流和钾离子外流等作用均受到抑制。实验结果表明，在创伤弧菌溶细胞素的活性发挥中， rVvhA中的V201和V289两个氨基酸与该蛋白质损伤靶细胞时引起胞内外离子平衡失调有关， 并能影响该蛋白质的溶血活性和细胞毒作用。