跨膜逆向转运蛋白NHXFS1多克隆抗体的制备及应用

摘要 : NHXFS1基因是通过DNA家族改组(DNA family shuffling)技术， 以拟南芥、水稻和菊花的液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(NHX1)为亲本获得的活性显著增强的新基因。为制备该蛋白的多克隆抗体， 对该蛋白进行跨膜结构分析， 选取跨膜蛋白的C末端为靶标， 并将其克隆到原核表达载体pET32a中， 成功构建了原核融合蛋白pET32a-NHXFS1-抗原表达载体， 转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。通过镍柱亲和层析纯化该融合表达蛋白， 获得了纯度约为80%的纯化蛋白，用于免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA实验表明， 该抗体的效价达到1:128 000， 提取表达NHXFS1蛋白的酵母液泡经该多克隆抗体Western blot检测， 证明该抗体具有较好的NHXFS1蛋白特异性。NHXFS1多克隆抗体的制备为进一步认识NHXFS1新蛋白结构与功能以及植物耐盐分子生物学的研究奠定了基础。