嗜热真菌热稳定性β-葡萄糖苷酶的克隆表达、纯化及酶学性质

摘要 : 从嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var. levisporus)中克隆出β-葡萄糖苷酶基因bglII的全长序列， GenBank注册号为EU263992。将该基因插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K中以获得重组质粒， 将重组质粒转导入毕赤酵母中，　大量筛选后获得高效表达β-葡萄糖苷酶的酵母工程菌株。经甲醇诱导6 d， 培养基中β-葡萄糖苷酶的活力可达0.23 U/mg。该酶的最适反应pH为5.0， 最适反应温度为50 ℃。通过DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析纯化了该重组蛋白质。SDS-PAGE测得该重组蛋白质分子量约为118 kDa。