抗病毒基因MxA真核表达载体的构建及在鸡细胞中的表达

刘莉　采克俊　张易祥　何　湃¹　丁志丽　张念慈^*

湖州师范学院生命科学学院, 湖州 313000; ¹苏州大学生命科学学院, 苏州 215006

摘要 : 将人抗病毒蛋白基因MxA与携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒重组后构建MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经PCR和酶切方法鉴定后，重组质粒在脂质体介导下转染鸡成纤维细胞和睾丸组织原代细胞，通过荧光观察， RT-PCR及细胞免疫组化检测目的基因的表达。结果表明， MxA基因片段已经被克隆到pEGFP-C1表达载体，成功构建了MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经该重组质粒转染后的鸡细胞的胞质中呈现颗粒状分布的绿色荧光， RT-PCR扩增出EGFP和MxA基因的特异性片断，免疫组化结果显示EGFP报告基因在细胞内的阳性表达，并表现出MxA的表达特征，间接证明了MxA可在鸡细胞中表达。MxA基因真核表达载体的成功构建以及在鸡细胞中的表达为进一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的应用打下了基础。